Preview

Вопросы вирусологии

Расширенный поиск

Моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа А/Н7N3 (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus: Influenza A virus)

https://doi.org/10.36233/0507-4088-45

Полный текст:

Аннотация

Введение. Варианты вируса гриппа (ВГ) А подтипа Н7, как и Н5, обладают высоким пандемическим потенциалом. Однако имеющиеся сведения об антигенной структуре гемагглютинина (HA) Н7 значительно уступают по объёму аналогичным данным в отношении НА подтипа Н5.

Цели исследования – разработка и характеристика панели моноклональных антител (МКАТ), направленных к НА подтипа Н7 возбудителя гриппа А.

Материал и методы. Культуру вируса накапливали в 10-дневных куриных эмбрионах. Очистку и концентрацию вирусных частиц, определение концентрации белка, получение МКАТ и асцитных жидкостей, реакцию гемагглютинации (РГА) и реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), оценку активности антител в непрямом иммуноферментном анализе (ИФА), а также определение изотипов МКАТ и реакцию нейтрализации (РН) проводили стандартными способами.

Результаты. Полученные МКАТ к штамму А/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) исследованы в РТГА с набором штаммов разных лет выделения, относящихся к различным эволюционным группам. Во всех случаях антитела обладали сниженной реакционной способностью по сравнению с вирусом-иммуногеном. Выявлено перекрёстное взаимодействие МКАТ 9E11 и 9G12 в РТГА с ВГ А/H15.

Обсуждение. Возбудитель гриппа А с НА подтипа Н7 может послужить потенциальным агентом будущей пандемии. Разработка панели МКАТ к НА этого подтипа представляется актуальной задачей как для ветеринарии, так и для общественного здравоохранения.

Заключение. Полученные нами антитела могут найти применение не только для эпитопного картирования НA подтипа вируса Н7 (которое к настоящему времени недостаточно разработано) и в качестве реагентов тест-систем, но и с целью определения общих («универсальных») эпитопов в данной молекуле у разных штаммов Н7.

Для цитирования:


Сорокин Е.В., Царёва Т.Р., Руднева И.А., Тимофеев Б.И., Ляшко А.В., Баланова М.А., Артёмов Е.К., Гребенникова Т.В., Тимофеева Т.А. Моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа А/Н7N3 (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus: Influenza A virus). Вопросы вирусологии. 2021;66(3):189-197. https://doi.org/10.36233/0507-4088-45

For citation:


Sorokin E.V., Tsareva T.R., Rudneva I.A., Timofeev B.I., Lyashko A.V., Balanova M.A., Artemov E.K., Grebennikova T.V., Timofeeva T.A. Monoclonal antibodies to hemagglutinin of influenza A/H7N3 virus (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus: Influenza A virus). Problems of Virology. 2021;66(3):189-197. (In Russ.) https://doi.org/10.36233/0507-4088-45

Введение

Вирус гриппа (ВГ) с гемагглютинином (НА) подтипа Н7 впервые идентифицирован в 1955 г. по модели штамма A/chicken/Bresia/1/1902 (H7N7), ставшего причиной крупной эпизоотии в Европе в начале XX в. [1]. Спустя столетие на европейской территории произошла ещё одна вспышка, вызванная вирусом птиц H7N7, при которой были также случаи поражения людей [2][3]. Затем с февраля 2013 г., а именно в начале сезона весенней миграции птиц, в Китайской Народной Республике (КНР) возникали спорадические эпизоды заболевания в человеческой популяции, связанные с ВГ птиц подтипа H7N9. Источником большинства подобных случаев были инфицированные домашние птицы, переносившие инфекцию бессимптомно. Массовая гибель птиц тогда не была зарегистрирована, однако выявлено несколько семейных очагов заболевания у людей, все члены семей которых могли контактировать с птицами. Под наблюдением специалистов находились около 2 тыс. человек, имевших контакты с заболевшими, в результате чего была показана ограниченная способность ВГ птиц А (H7N9) передаваться воздушно-капельным путём
от человека к человеку. Повышенное сродство этого патогена к клеточным рецепторам «человеческого» типа тоже подтверждает подобную возможность [4]. Таким образом, варианты ВГ А подтипа Н7, как и «печально известного» Н5, также обладают высоким пандемическим потенциалом. Между тем сведения об антигенной структуре гемагглютинина (НА) Н7 значительно уступают по объёму аналогичным данным в отношении подтипа Н5.

Изложенные факты определяют значимость исследования эволюционной изменчивости и антигенной структуры молекулы НА подтипа Н7. Достижению этой цели может способствовать использование специфичных моноклональных антител (МКАТ). Подобные антитела успешно применяют для типирования ВГ посредством таких простых и доступных иммунологических методов, как реакция нейтрализации (РН) и реакция торможения гемагглютинации (РТГА). МКАТ, полученные к НА H7, применяются с целью эпитопного картирования этой молекулы изолята А/ H7N9, выделенного в КНР [5–7]. Они также служат ценным исследовательским инструментом в процессе антигенной характеристики новых вирусных штаммов, что при сопоставлении с данными генетического анализа позволяет выявить закономерности эволюционной изменчивости ВГ.

Целями настоящей работы явились разработка и характеристика панели МКАТ, направленных к молекуле НА подтипа Н7 возбудителя гриппа А.

Материал и методы

Получение аллантоисной жидкости, содержащей вирус гриппа. Культивирование ВГ A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3), A/FPV/Rostock/34 (H7N1), A/FPV/Weybridge (H7N7), A/Anhui/1/2013 (H7N9), A/Shanghai/2/2013 (H7N9), A/сhicken/NJ/294508-12/2004 (H7N2), A/chicken/NJ/294598-12/2004-MA (H7N2) [8], A/avian/NJ/273874/2003 (H7N2), A/duck/Moscow/4970/2013 (H1N1), A/duck/Moscow/4182/2010 (H5N3) и A/duck/Australia/341/83 (H15N8) проводили в аллантоисной полости куриных эмбрионов согласно методическим рекомендациям ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А Смородинцева» (НИИ гриппа) Минздрава России [9].

Очистка и концентрация вируса. Вирусные частицы из содержащей ВГ A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) аллантоисной жидкости осаждали ультрацентрифугированием при 50 000 g в течение 2 ч и суспендировали в малом количестве (1 мл) 10 мМ Трис-ЭДТА буфера, рН 7,2 (STE). После этого выполняли очистку вируса через градиент 20–60% сахарозы ультрацентрифугированием при 100 000 g в течение 2,5 ч с последующим осаждением вирусных частиц из зоны 36–40% сахарозы на дно при 120 000 g на протяжении 1 ч. Осадок ресуспендировали в буфере STE. Полученную суспензию хранили до исследования в замороженном состоянии при −75 °С.

Определение концентрации белка. Концентрацию белка оценивали с помощью набора «BCATM Protein Assay Kit» («Pierce», США); реакцию проводили в соответствии с инструкцией производителя. Результаты учитывали при длине волны 560 нм на спектрофотометре Multiskan FC («ThermoFisher Scientific», Финляндия). Значения концентрации белка в исследуемых пробах рассчитывали по калибровочной кривой, линейный участок которой соответствовал интервалу концентраций 0,05–2,0 мг/мл по белку.

Получение моноклональных антител. МКАТ к вирусу А/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) получали по модифицированному методу, описанному ранее [10].

Получение асцитных жидкостей. Мышам линии BALB/c, предварительно праймированым пристаном (С19H40) (0,5 мл на особь), внутрибрюшинно вводили гибридные клетки в количестве 3–5 млн на особь. Спустя 2–3 нед асцитную жидкость отбирали из брюшной полости мышей. Исследования выполняли согласно «Пpавилам пpоведения pабот с иcпользованием экспеpиментальных животных» (приказ МЗ РФ N 266 от 19.06.2003).

Реакция гемагглютинации и реакция торможения гемагглютинации. Реакции гемагглютинации (РГА) и торможения гемагглютинации (РТГА) ставили стандартным методом в соответствии с методическими рекомендациями НИИ гриппа [9]. За титр антител принимали их наибольшее разведение, полностью подавляющее гемагглютинацию 8 ГАЕ вируса (ГАЕ – гемагглютинирующая единица).

Оценку активности полученных моноклональных антител в непрямом иммунофлуоресцентном анализе выполняли согласно описанной ранее методике [10].

Определение изотипов моноклональных антител. Изотипы МКАТ определяли в ИФА с использованием коммерческого набора «IsoStrip™ Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit» («Sigma», Германия) согласно инструкциям фирмы изготовителя.

Оценку нейтрализующей активности моноклональных антител в микрокультуральном иммунофлуоресцентном анализе также проводили по описанной ранее методике [10].

Иммуноблоттинг. Вирусные белки разделяли при помощи электрофореза в 5–20%-градиентном полиакриламидном геле (ПАГ) в восстанавливающих условиях (с добавлением β-меркаптоэтанола, С2H6SO) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану Millipore толщиной 0,45 мкм («SigmaAldrich», США) посредством элюции. Инкубацию МКАТ в блокирующем растворе бычьей фетальной сыворотки (ФСБ), содержащем 5% бычьего сывороточного альбумина (БСА), осуществляли при температуре 37 °С в течение 2 ч, после чего обрабатывали пероксидазным конъюгатом антител к молекулам IgG мыши («Sigma»), разведённым блокирующим буфером в соотношении 1 : 1000, при 37 °С на протяжении 1 ч. Окраску белков на нитроцеллюлозной мембране проводили раствором для блоттинга, содержащим 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина гидрохлорид (ТМБ) (C16H20N2) с добавлением пероксида водорода (H2O2).

Построение филогенетических деревьев вирусов гриппа А подтипа Н7. При построении деревьев применяли 2 различные программы: FastTree v.2.1.10 [11], в основе которой заложен метод присоединения соседей (neighbor-joining, NJ) с последующим уточнением методами минимальной эволюции (замены ближайшего соседа – nearest neighbour interchange, NNI и обрезки/пересадки ветвей субдеревьев – subtree pruning and regrafting, SPR) и максимального правдоподобия (maximal likehood estimation, MLE) на матрице замен LG [12], и алгоритм RAxML v.8.2.10 [13], использующий MLE на матрицах замен LG и FLU [14].

Авторы подтверждают соблюдение институциональных и национальных стандартов по использованию лабораторных животных в соответствии с «Consensus Author Guidelines for Animal Use» (IAVES, 23 July 2010). Протокол исследования одобрен Этическим комитетом ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России (Протокол № 13/1 от 21.10.2019).

Результаты

В результате отбора положительных клонов получена панель из 7 МКАТ (7D11, 7H9, 8A3, 9B2, 9B10, 9E11 и 9G2), специфически взаимодействующих с очищенным концентратом вируса-иммуногена A/mallard/Netherlands/12/2000(H7N3). Согласно данным вестерн-блот анализа все антитела оказались направленными к большой субъединице (НА1) НА (молекулярная масса 57 кДа), что предполагает их взаимодействие с линейными эпитопами данной молекулы [15][16]. Результаты определения класса и субкласса тяжёлых цепей в составе иммуноглобулина показали, что все МКАТ принадлежали к классу IgG, но к различным его изотипам: в частности, 7D11 к IgG3, 7H9 и 9E11 – к IgG2a, 9B2 и 9B10 – к IgG1. Полученные МКАТ взаимодействовали в ИФА с вирусом A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) в диапазоне титров 10−4–10−7. Обнаружено, что антитела 7D11, 7H9 и 9B2 обладали значительной нейтрализующей активностью по отношению не только к вирусу-иммуногену, но и к высокопатогенному штамму A/Anhui/1/2013 (H7N9). Характеристика полученных МКАТ представлена в табл. 1.

Таблица 1. Иммунохимические и биологические свойства моноклональных антител к вирусу гриппа А/Н7N3
Table 1. Immunochemical and biological properties of monoclonal antibodies to influenza A/H7N3 virus


Примечание. *приведены данные одного из 3 типичных экспериментов; **титры МКА представлены в обратных разведениях; ***нейтра- лизующим титром моноклональных антител считали последнее их разведение, при котором наблюдалось 2-кратное снижение оптической плотности при длине волны 450 нм (ОП450) по сравнению с контролем репродукции вируса; н.и. – не исследовались; НА1 – большая субъеди- ница молекулы гемагглютинина; ИФА – иммуноферментный анализ.
Note. * data from one of three typical experiments are presented; **monoclonal antibodies titers are presented in reverse dilutions; ***the neutralizing titer of monoclonal antibodies was considered to be the last dilution in which there was a twofold decrease in optical density at a wavelength of 450 nm (OD450) compared to the control of virus reproduction; n.i., not investigated; HA1, large subunit of hemagglutinin molecule; ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay.

Для типирования и антигенного анализа вирусных штаммов наиболее широкое применение находит РТГА. Установлено, что все МКАТ обладали выраженной антигемагглютинирующей активностью в отношении вируса-иммуногена A/mallard/ Netherlands/12/2000 (H7N3) (табл. 2). По степени интенсивности взаимодействия в РТГА полученные антитела можно условно разделить на 2 группы: 1) МКАТ (8А3 и 9B10) со средней активностью (титры 1 : 640 – 1 : 1280); 2) МКАТ (7D11, 7H9, 9B2, 9E11 и 9G12) с высокой активностью (титры 1 : 103 – 1 : 2 × 103). Полученные антитела исследованы в данной реакции с набором штаммов ВГ подтипа Н7 разных лет выделения, относящихся к различным эволюционным группам (табл. 2). Во всех случаях МКАТ обладали сниженной реакционной способностью по сравнению с таковой для вируса-иммуногена. Кроме того, представлялось важным оценить реакционную способность антител с ВГ различных подтипов НА – как эволюционно близких к Н7 (Н15), так и эволюционно удалённых (Н5,Н1) (рис. 1) [17]. В результате выявлено перекрёстное взаимодействие 9E11 и 9G12 в РТГА с вирусом А/H15. С возбудителями подтипов H5N3 и H1N1 все полученные нами МКАТ не реагировали.

Рис. 1. Эволюционные связи между вирусами гриппа водоплавающих птиц и млекопитающих, основанные на результатах полногеномного секвенирования генов гемагглютинина репрезентативных вирусных штаммов [17].
Fig. 1. Evolutionary relationships between waterfowl and mammalian influenza viruses based on the results of genome-wide gene sequencing of representative viral strains [17].

Таблица 2. Активность моноклональных антител в реакции торможения гемагглютинации с различными штаммами вируса гриппа А (титры)
Table 2. Monoclonal antibodies activity in hemagglutination inhibition test with different influenza A virus strains (titers)


Примечание. * приведены данные одного из 3 типичных экспериментов; **приведены обратные величины титра моноклональных антител в реакции торможения гемагглютинации; н.и. – не исследовались.
Note. * data from one of three typical experiments are presented; **the inverse values of the monoclonal antibodies titer in hemagglutination inhibition are given; n.i., not investigated.

Чтобы теоретически подтвердить филогенетическую удалённость исследованных штаммов ВГ А/H7 от использованного нами для получения МКАТ вируса A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3), проведено построение филогенетических деревьев с использованием базы данных GISAID EpiFluTM для возбудителей гриппа А с НА подтипа Н7. Для построения деревьев отобрано 4491 полных и полностью определённых аминокислотных последовательностей вирусов с НА H7, идентифицированных с 1902 по 2020 г., среди которых оказалось 1999 уникальных. Их выравнивание выполнено с помощью программы Clustal Omega [18] и признано нами приемлемым. Как и ожидалось, основные различия в длине последовательностей были обусловлены наличием вариабельности в сайте нарезания – между большой (HА1) и малой (HА2) субъединицами молекулы НА.

Полученные деревья сравнивались с аналогичными данными более ранних исследований филогении H7 [19] и между собой, как визуально, так и с использованием метрики Робинсона–Фулдса [20] при помощи пакета программ Phangorn v.2.5.5 (https://www. rdocumentation.org/packages/phangorn). Результаты сравнения (табл. 3) показывают хорошее согласие построенных различными методами деревьев H7, что подтверждает возможность использования их для оценки дистанции между тестируемыми штаммами. На рис. 2 представлено построенное нами филогенетическое дерево вирусов А/Н7, из которого видно, что использованный «европейский» вирус-иммуноген A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) достаточно далеко расположен от «корневых» ВГ А/Н7 штаммов A/FPV/Rostock/34 (H7N1), A/FPV/Weybridge (H7N7), равно как и от «азиатских», сравнительно недавних изолятов A/Anhui/1/2013 (H7N9), A/Shanghai/2/2013 (H7N9), и ещё далее – от A/сhicken/NJ/294508-12/2004 (H7N2), принадлежащего «американской» ветви дерева. К сожалению, последовательность штамма A/avian/ NJ/273874/2003 (H7N2) в базе данных не найдена, вероятно, в связи с тем, что она не была секвенирована.

Рис. 2. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой RAxML с матрицей замен FLU.
Примечание. Шкала характеризует дату сбора штаммов (от 1902 до 2020 г.).
Fig. 2. The phylogenetic tree for H7 hemagglutinin constructed by the RAxML program with the FLU substitution matrix.
Note. The scale characterizes the date of collection of strains (from 1902 to 2020).

Таблица 3. Взвешенная дистанция Робинсона–Фулдса между филогенетическими деревьями (в процентах)
Table 3. The Robinson–Foulds weighted distance between phylogenetic trees (at percentage)


Примечание. За расстояние между деревьями принимается сумма A + B (где А – количество разбиений первого дерева, которые не при- сутствуют во втором, B – аналогичное количество для второго дерева, которые не присутствуют в первом), отнесённая к общему количеству разбиений и выраженная в процентах (взвешенная дистанция Робинсона–Фулдса). В ячейках таблицы приведены различия в процентах между деревьями, построенными при помощи разных программ.
Note. The distance between the trees is taken as the sum of A + B (where A is the number of partitions of the first tree that are not present in the second, B is the number of partitions of the second tree that are not present in the first) assigned to the total number of partitions and expressed in percent (Robinson–Foulds weighted distance). The table cells show the percentage differences between trees constructed using different programs.

Полные версии построенных деревьев приведены в сопроводительных материалах (https://doi.org/10.36233/0507-4088-45supl1, https://doi.org/10.36233/0507-4088-45supl2, https://doi.org/10.36233/0507-4088-45supl3, https://doi.org/10.36233/0507-4088-45supl4, https://doi.org/10.36233/0507-4088-45supl5, https://doi.org/10.36233/0507-4088-45supl6).

Обсуждение

Возбудитель гриппа А с гемагглютинином подтипа Н7 может стать потенциальной причиной будущей пандемии [21]. В этой связи поиск направленных против данного патогена средств, а также компонентов диагностических тест-систем [22][23] для быстрой идентификации и типирования новых изолятов является актуальной задачей как для ветеринарии, так и для общественного здравоохранения. С этой целью в настоящем исследовании разработана панель МКАТ к молекуле НА низкопатогенного ВГ A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3). Ранее он был выбран в качестве донора НА для создания вируса-реассортанта – вакцинного штамма [24]. В более поздней работе предложены векторные вакцины на основе этого же штамма [25]. Отметим, что A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3), так же как и A/mallard/Netherlands/2/2000 (H10N7), послужил прототипом высокопатогенного природного реассортанта A/chicken/Netherlands/1/2003 (H7N7), вызвавшего эпизоотию в Европе в начале XX в. Таким образом, выбор возбудителя-иммуногена для получения МКАТ был сделан не случайно.

Полученные нами антитела к «европейскому» возбудителю A/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3), как оказалось, слабо реагируют в РТГА с патогенными «азиатскими» (A/Anhui/1/2013 (H7N9) и A/Shanghai/2/2013 (H7N9)) вирусами 2013 г., ещё более слабо – с «американскими» (A/сhicken/NJ/294508-12/2004 (H7N2), A/avian/NJ/273874/2003 (H7N2) и A/chicken/NJ/294598-12/2004-MA (H7N2)), а также «корневыми европейскими» (A/FPV/Rostock/34 (H7N1) и A/FPV/Weybridge (H7N7)) изолятами этого подтипа. Тем не менее некоторые МКАТ (7D11, 7H9, 9E11 и 9G12) демонстрируют высокие титры в РТГА с филогенетически удалёнными вирусами. Поэтому нам представлялось важным построить более современные филогенетические деревья с целью определения удалённости друг от друга используемых штаммов, что было сделано с помощью программ, оптимизированных к увеличению количества последовательностей. Результат оказался аналогичным «старым» версиям филогении [19], в которых вирусы гриппа А/H7 подразделяются на 4 основные ветви: «австралийскую», «евразийскую», «лошадиную» и «американскую», причём последняя является наиболее удалённой от остальных. Такое распределение связано, по-видимому, с преимущественно меридианно-направленной миграцией диких птиц – переносчиков птичьего гриппа [26].

К сожалению, МКАТ 9E11 и 9G12, обнаружившие связывание в РТГА с вирусом Н15 (эволюционно близким к Н7), нельзя использовать для дифференциальной диагностики и типирования НА в иммунологических тестах. В дальнейшем планируется исследовать их реактогенную способность по отношению к более развёрнутому спектру возбудителей гриппа с различными подтипами НА.

Заключение

Достаточно высокая вируснейтрализующая активность антител 7D11, 7H9 и 9B2 предполагает возможность их перспективного применения в качестве реагентов диагностических тест-систем, профилактических и лечебных средств.

Все МКАТ панели, представленной в данной работе, в дальнейшем планируется использовать для изучения особенностей тонкой антигенной структуры молекулы Н7. Кроме того, полученные нами антитела могут найти применение не только для эпитопного картирования НА Н7 (которое к настоящему времени, к сожалению, недостаточно разработано) и в качестве реагентов тест-систем, но и для определения общих («универсальных») эпитопов в молекуле НА подтипа Н7 разных штаммов.

Список литературы

1. Львов Д.К., ред. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. М.: МИА; 2013. 2. Elbers A.R., Fabri T.H., de Vries T.S., de Wit J.J., Pijpers A., Koch G. The highly pathogenic avian influenza A (H7N7) virus epidemic in the Netherlands in 2003 – lessons learned from the first five outbreaks. Avian Dis. 2004; 48(3): 691–705. https://doi.org/10.1637/7149

2. Kemink S.A., Fouchier R.A., Rozendaal F.W., Broekman J.M., Koopmans M., Osterhaus A.D., et al. A fatal infection due to avian influenza-A (H7N7) virus and adjustment of the preventive measures. Ned. Tijdschr. Geneeskd. 2004; 148(44): 2190–4.

3. WHO. Overview of the emergence and characteristics of the avian influenza A(H7N9) virus. Available at: http://www.who.int/influenza/human_animal-interface/influenza-h7n9/WHO_H7N9_review_ 31May13.pdf (accessed May 14, 2021).

4. Schmeiser F., Vasudevan A., Verma S., Wang W., Alvarad E., Weiss C., et al. Antibodies to antigenic site A of influenza H7 hemagglutinin provide protection against H7N9 challenge. PLoS One. 2015; 10(1): e0117108. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0117108

5. Thornburg N.J., Zhang H., Bangaru S., Sapparapu G., Kose N., Lampley R.M., et al. H7N9 influenza virus neutralizing antibodies that possess few somatic mutations. J. Clin. Invest. 2016; 126(4): 1482–94. https://doi.org/10.1172/jci85317

6. Yao L., Chen Y., Wang X., Bi Z., Xiao Q., Lei J., et al. Identification of antigenic epitopes in the haemagglutinin of H7 avian influenza virus. Avian. Pathol. 2020; 49(1): 62–73. https://doi.org/10.1080/0 3079457.2019.1666971

7. Седова Е.С., Верховская Л.В., Артёмова Э.А., Щербинин Д.Н., Лысенко А.А., Руднева И.А., и др. Защита мышей от заражения вирусом гриппа птиц субтипа Н7 с помощью иммунизации рекомбинантным аденовирусом, кодирующим консервативные антигены вируса гриппа А. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2020; 20(1): 60–7. https://doi. org/10.30895/2221-996X-2020-20-1-60-67

8. Суховецкая В.Ф., Дондурей Е.А., Дриневский В.П., Соминина А.А., Майорова В.Г., Писарева М.М., и др. Методические рекомендации. Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах и их идентификация. Санкт-Петербург; 2006.

9. Сорокин Е.В., Царёва Т.Р., Желтухина А.И. Моноклональные антитела к гемагглютинину вирусов гриппа В викторианской эволюционной линии. Вопросы вирусологии. 2018; 63(6): 275– 80. https://doi.org/10.18821/0507-4088-2018-63-6-275-280

10. Price M.N., Dehal P.S., Arkin A.P. FastTree 2-approximately maximum-likelihood trees for large alignments. PLoS One. 2010; 5(3): e9490. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0009490

11. Le S.Q., Gascuel O. An improved general amino acid replacement matrix. Mol. Biol. Evol. 2008; 25(7): 1307–20. https://doi. org/10.1093/molbev/msn067

12. Stamatakis A. RAxML version 8: a tool for phylogenetic analysis and post-analysis of large phylogenies. Bioinformatics. 2014; 30(9): 1312–3. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btu033

13. Dang C.C., Le Q.S., Gascuel O., Le V.S. FLU, an amino acid substitution model for influenza proteins. BMC Evol. Biol. 2010; 10: 99. https://doi.org/10.1186/1471-2148-10-99

14. Кущ А.А., Климова Р.Р., Масалова О.В., Фёдорова Н.Е., Ботиков А.Г., Федякина И.Т., и др. Получение и свойства моноклональных антител к высокопатогенному штамму вируса гриппа птиц A(H5N1), выделенного на территории Российской Федерации. Вопросы вирусологии. 2008; 53(5): 9–14.

15. Климова Р.Р., Масалова О.В., Бурцева Е.И., Чичев Е.В., Леснова Е.И., Оскерко Т.А., и др. Моноклональные антитела к пандемическому вирусу гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl, обладающие высокой вируснейтрализующей активностью. Вопросы вирусологии. 2011; 56(3): 15–20.

16. Matrosovich M.N., Klenk H.-D., Kawaoka Y. Receptor specificity, host-range, and pathogenicity of influenza viruses. In: Kawaoka Y., ed. Influenza Virology: Current Topics. Wymondham, UK: Caister Academic Press; 2006: 95–138.

17. Sievers F., Wilm A., Dineen D.G., Gibson T.J., Karplus K., Li W., et al. Fast, scalable generation of high-quality protein multiple sequence alignments using Clustal Omega. Mol. Syst. Biol. 2011; 7: 539. https://doi.org/10.1038/msb.2011.75

18. Banks J., Speidel E.C., McCauley J.W., Alexander D.J. Phylogenetic analysis of H7 haemagglutinin subtype influenza A viruses. Arch. Virol. 2000; 145(5): 1047–58. https://doi.org/10.1007/s007050050695

19. Robinson D.F., Foulds L.R. Comparison of phylogenetic trees. Math. Biosci. 1981; 53(1): 131–47. https://doi.org/10.1016/0025- 5564(81)90043-2

20. Webster R.G., Govorkova E.A. Continuing challenges in influenza. Ann. NY Acad. Sci. 2014; 1323(1): 115–39. https://doi.org/10.1111/ nyas.12462

21. Chen L., Ruan F., Sun J., Chen H., Liu M., Zhou J., et al. Establishment of sandwich ELISA for detecting the H7 subtype influenza A virus. J. Med Virol. 2019; 91(6): 1168–71. https://doi.org/10.1002/jmv.25408

22. Dong J., Fan J., Wang J., Zhang Q., Yang Y., Jia Y., et al. Development and evaluation of a C-ELISA for rapid detection of antibody to AIV-H7. Anal. Biochem. 2019; 572: 52–7. https://doi.org/10.1016/j. ab.2019.02.024

23. Jadhao S.J., Achenbach J., Swayne D.E., Donis R., Cox N., Matsuoka Y. Development of Eurasian H7N7/PR8 high growth reassortant virus for clinical evaluation as an inactivated pandemic influenza vaccine. Vaccine. 2008; 26(14): 742–50. https://doi.org/10.1016/j. vaccine.2008.01.036

24. Meseda C.A., Atukorale V., Soto J., Eichelberger M.C., Gao J., Wang W., et al. Immunogenicity and protection against influenza H7N3 in mice by modified vaccinia virus Ankara vectors expressing influenza virus hemagglutinin or neuraminidase. Sci. Rep. 2018; 8(1): 5364. https://doi.org/10.1038/s41598-018-23712-9

25. Боголюбов А.С., Жданова О.В., Кравченко М.В. Справочник по орнитологии. Миграции птиц. М.: Экосистема; 2006.


Об авторах

Е. В. Сорокин
ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России
Россия

197376, Санкт-Петербург



Т. Р. Царёва
ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России
Россия

197376, Санкт-Петербург



И. А. Руднева
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

123098, Москва



Б. И. Тимофеев
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

123098, Москва



А. В. Ляшко
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

123098, Москва



М. А. Баланова
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

123098, Москва



Е. К. Артёмов
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

123098, Москва



Т. В. Гребенникова
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

123098, Москва



Т. А. Тимофеева
Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России
Россия

Тимофеева Татьяна Анатольевна, заведующая лабораторией физиологии вирусов

123098, Москва



Дополнительные файлы

1. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой FastTree с матрицей замен LeGasquel (LG). Формат Newick для хранения филогенетических деревьев.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (246KB)    
Метаданные
2. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой FastTree с матрицей замен LeGasquel (LG). Векторное изображение.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (932KB)    
Метаданные
3. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой RAxML с матрицей замен FLU. Формат Newick для хранения филогенетических деревьев.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (288KB)    
Метаданные
4. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой RAxML с матрицей замен FLU. Векторное изображение.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (1MB)    
Метаданные
5. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой RAxML с матрицей замен LeGasquel (LG). Формат Newick для хранения филогенетических деревьев.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (288KB)    
Метаданные
6. Филогенетическое дерево гемагглютинина H7, построенное программой RAxML с матрицей замен LeGasquel (LG). Векторное изображение.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (1MB)    
Метаданные

Для цитирования:


Сорокин Е.В., Царёва Т.Р., Руднева И.А., Тимофеев Б.И., Ляшко А.В., Баланова М.А., Артёмов Е.К., Гребенникова Т.В., Тимофеева Т.А. Моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа А/Н7N3 (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus: Influenza A virus). Вопросы вирусологии. 2021;66(3):189-197. https://doi.org/10.36233/0507-4088-45

For citation:


Sorokin E.V., Tsareva T.R., Rudneva I.A., Timofeev B.I., Lyashko A.V., Balanova M.A., Artemov E.K., Grebennikova T.V., Timofeeva T.A. Monoclonal antibodies to hemagglutinin of influenza A/H7N3 virus (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus: Influenza A virus). Problems of Virology. 2021;66(3):189-197. (In Russ.) https://doi.org/10.36233/0507-4088-45

Просмотров: 225


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0507-4088 (Print)
ISSN 2411-2097 (Online)