Preview

Вопросы вирусологии

Расширенный поиск

Особенности репликации вируса африканской чумы свиней в присутствии рекомбинантных белков CD2v, pX69R и pE248R

https://doi.org/10.36233/0507-4088-2019-64-4-193-200

Полный текст:

Аннотация

Введение. Африканская чума свиней (АЧС) является особо опасной геморрагической болезнью свиней, которую вызывает крупный ДНК-содержащий вирус семейства Asfaviridae). Поскольку нет эффективных и безопасных вакцин против АЧС, актуально изучение функций белков вируса путём анализа особенностей репликации вируса АЧС в присутствии рекомбинантных белков in vitro.

Цель - изучить функции и степень влияния CD2v, pE248R и pX69R на скорость и уровень репродукции вируса АЧС in vitro для разработки подходов к созданию вакцины против АЧС.

Материал и методы. Использовали вирус АЧС изолят Krasnodar 07/17 и штамм АЧС/ВНИИЗЖ/CV-I. Гены X69R, EP402R и E248R клонировали в векторе pJET1.2/blunt в клетках Е. coli JM-109. Локализацию рекомбинантных белков в клетках CV-1 изучали в реакции прямой иммунофлюоресценции с использованием ФИТЦ-конъюгата поликлональных антител. Уровень репродукции вируса АЧС оценивали в реакции гемадсорбции и в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Результаты. Сконструированы экспрессирующие рекомбинантные плазмиды pCI-neo/E248R, pCI-neo/EP402R и pCl-neo/X69R. Определена локализация и подтверждена специфичность полученных белков CD2v, pE248R и pX69R, для которых установлено, что они повышают уровень накопления вируса АЧС на 3-5-е сутки эксперимента на ~1,2-1,5 1дГАдЕ50/см3 по сравнению с отрицательным контролем.

Обсуждение. В результате анализа установлена важная роль белков CD2v, pX69R и pE248R в репродукции вируса, поскольку они влияют на её уровень. Функция белка pX69R неизвестна, однако в проведённых экспериментах определено его влияние на репродукцию вируса АЧС, проявившееся в увеличении уровня его накопления. Заключение. Данная методология позволяет изучить характер влияния белков с неизвестной функцией на репликацию вируса АЧС.

Об авторах

А. Мазлум
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Россия

Мазлум Али - кандидат биологических наук, ведущий ветеринарный врач, ФГБУ «ВНИИЗЖ».

600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.



И. Ю. Жуков
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Россия

600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.



Е. В. Аронова
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Россия

600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.



А. С. Иголкин
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Россия

600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.



Н. Н. Власова
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Россия

600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.



Список литературы

1. Garner G., Saville P., Fediavsky A., eds. African swine fever. Available at: http://lrd.spc.int/ext/Disease_Manual_Final/a120african_swine_fever.html

2. Rowlands R.J., Michaud V., Heath L., Hutchings G., Oura C., Vosloo W., et al. African swine fever virus isolate, Georgia, 2007. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14(12): 1870-4. Doi: https://doi.org/10.3201/eid1412.080591

3. Gallardo C., Nieto R., Soler A., Pelayo V., Fernandez-Pinero J., Markowska-Daniel I., et al. Assessment of African swine fever diagnostic techniques as a response to the epidemic outbreaks in Eastern European Union Countries: How to improve surveillance and control programs. J. Clin. Microbiol. 2015; 53(8): 2555-65. Doi: https://doi.org/10.1128/JCM.00857-15

4. EFSA Panel on Animal Health and Welfare (AHAW). African swine fever virus. EFSA J. 2015; 13(7): 4163-92. Doi: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2015.4163

5. World Organisation for Animal Health (OIE). African swine fever in Moldova. Immediate notification report. REF OIE: 21095. Available at: http://www.oie.int/wahis_2/temp/reports/en_imm_0000021095_20161004_170450.pdf

6. OIE, 2017. World Animal Health Information Disease (WAHID). Paris, France: World Organisation of Animal Health.

7. OIE, 2018. World Animal Health Information Disease (WAHID). Paris, France: World Organisation of Animal Health.

8. World Organisation for Animal Health. African swine fever in Cote d’Ivoire. Immediate notification report. REF OIE: 15914. Available at: http://www.oie.int/wahis_2/temp/reports/en_imm_0000015914_20140828_131035.pdf

9. Болгова М.В., Балышев В.М., Пономарев В.Н., Неверовская Н.С. Паспортизация изолята «Девис» вируса африканской чумы свиней. В кн.: Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных». Часть 1. Покров; 2014: 43-7.

10. Galindo I., Hernaez B., Diaz-Gil G., Escribano J.M., Alonso C. A179L, a viral Bcl-2 homologue, targets the core Bcl-2 apoptotic machinery and its upstream BH3 activators with selective binding restrictions for Bid and Noxa. Virology. 2008; 375(2): 561-72. Doi: https://doi.org/10.1016/j.virol.2008.01.050

11. Rodriguez J.M., Yanez R.J., Almazan F., Vinuela E., Rodriguez J.F. African swine fever virus encodes a CD2 homolog responsible for the adhesion of erythrocytes to infected cells. J. Virol. 1993; 67(9): 5312-20.

12. Galindo I., Almazan F., Bustos M.J., Vinuela E., Carrascosa A.L. African swine fever virus EP153R open reading frame encodes a glycoprotein involved in the hemadsorption of infected cells. Virology. 2000; 266(2): 340-51. Doi: https://doi.org/10.1006/viro.1999.0080

13. Rowlands R.J., Duarte M.M., Boinas F., Hutchings G., Dixon L.K. The CD2v protein enhances African swine fever virus replication in the tick vector, Ornithodoros erraticus. Virology. 2009; 393(2): 319¬28. Doi: https://doi.org/10.1016/j.virol.2009.07.040

14. Rodriguez I., Nogal M.L., Redrejo-Rodriguez M., Bustos M.J., Salas M.L. The African swine fever virus virion membrane protein pE248R is required for virus infectivity and an early postentry event. J. Virol. 2009; 83(23): 12290-300. Doi: https://doi.org/10.1128/JVI.01333-09

15. Xiang Z., Mobley H.L.T. Vaxign: the first web-based vaccine design program for reverse vaccinology and applications for vaccine development. J. Biomed. Biotechnol. 2010; 2010: 297505. Doi: https://doi.org/10.1155/2010/297505

16. Xiang Z., He Y. Genome-wide prediction of vaccine targets for humanherpes simplex viruses using Vaxign reverse vaccinology. BMC Bioinformatics. 2013; 14(Suppl. 4): S2. Doi: https://doi.org/10.1186/1471-2105-14-S4-S2

17. Мазлум А., Зиняков Н.Г., Иголкин А.С., Власова Н.Н. Клонирование генов, кодирующих трансмембранные белки и белки, ответственные за вирулентность вируса африканской чумы свиней. Ветеринария сегодня. 2018; (2): 3-7. Doi: https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-2-25-3-7

18. Sambrook J., Russell D.W. The Condensed Protocols from Molecular Cloning: a Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor; 2006.

19. Burgess R.R. Elution of proteins from gels.MethodsEnzymol. 2009; 463: 565-72. Doi: https://doi.org/10.1016/S0076-6879(09)63032-9

20. Мазлум А., Шарыпова Д.В., Гаврилова В.Л. и др. Методические рекомендации по выделению и титрованию вируса африканской чумы свиней в культуре клеток селезёнки свиней. Владимир; 2019.

21. Мазлум А. и др. Методические рекомендации по оценке уровня репродукцию вируса африканской чумы свиней с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Владимир; 2019.

22. Мазлум А., Жуков И.Ю., Першин А.С., Иголкин А.С., Власова Н.Н. Влияние рекомбинантного белка p30 на репродукцию вируса африканской чумы свиней in vitro. Ветеринария сегодня. 2018; (3): 3-7. Doi: https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-3-26-3-7

23. Мазлум А., Власова Н.Н., Аронова Е.В., Иголкин А.С., Кривонос Р.А., Черных О.Ю. Определение корреляции показателя Ct и титра вируса африканской чумы свиней в биологических жидкостях. Ветеринария Кубани. 2018; 24(6): 4-7.

24. Власова Н.Н., Жуков И.Ю., Мазлум А., Шарыпова Д.В., Першин А.С., Иголкин А.С. Штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/ CV-1» вируса африканской чумы свиней, со сниженной вирулентностью для свиней, для вирусологических, диагностических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований. Патент РФ № 2675535; 2019.


Для цитирования:


Мазлум А., Жуков И.Ю., Аронова Е.В., Иголкин А.С., Власова Н.Н. Особенности репликации вируса африканской чумы свиней в присутствии рекомбинантных белков CD2v, pX69R и pE248R. Вопросы вирусологии. 2019;64(4):193-200. https://doi.org/10.36233/0507-4088-2019-64-4-193-200

For citation:


Mazloum A., Zhukov I.Yu., Aronova E.B., Igolkin A.S., Vlasova N.N. ASF virus replication features in the presence of recombinant proteins CD2v, pX69R and pE248R. Problems of Virology. 2019;64(4):193-200. (In Russ.) https://doi.org/10.36233/0507-4088-2019-64-4-193-200

Просмотров: 578


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0507-4088 (Print)
ISSN 2411-2097 (Online)