Preview

Вопросы вирусологии

Расширенный поиск
Том 64, № 4 (2019)
Скачать выпуск PDF
https://doi.org/10.36233/0507-4088-2018-64-4

ОБЗОРЫ 

150-155 278
Аннотация

Угроза быстрого распространения вируса Зика вследствие его завоза с территории эндемичных регионов дала импульс к интенсификации исследований эпидемиологии лихорадки Зика и её клинических проявлений, а также к созданию средств диагностики и профилактики данного заболевания. С 2013 по 2017 г. в России выявлено 18 случаев завоза инфекции туристами. Созданный на базе ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора референс-центр по мониторингу за лихорадкой Зика осуществляет консультативно-методическую помощь по вопросам лабораторной диагностики и мониторинга лихорадки, вызванной вирусом Зика. В связи с этим были изучены данные литературы о коммерчески доступных тест-системах для иммунодиагностики данной инфекции. В настоящее время для иммунодиагностики лихорадки Зика разработан ряд тест-систем для твердофазного иммуноферментного анализа, иммунохроматографии и метода флюоресцирующих антител. Компания Euroimmun (Германия) – пока единственный производитель, у которого имеются подробные данные по валидации специфичности производимых диагностических наборов. В независимых исследованиях подтверждено, что тест-системы Euroimmun обладают высокой специфичностью и чувствительностью. Это доказано при исследовании материала от различных групп населения, в том числе европейцев, посетивших эндемичные территории, а также жителей регионов, где циркулирует вирус Зика. Приведённые подробные характеристики тест-систем для иммунодиагностики лихорадки Зика компании Euroimmun позволяют сделать вывод о целесообразности их использования для обеспечения санитарной охраны территории РФ в рамках оперативной работы по выявлению антител у больных, предположительно инфицированных вирусом Зика.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 

156-164 241
Аннотация

Введение. Ротавирусная инфекция (РВИ), этиологическим агентом которой является дцРНК-содержащий вирус рода Rotavirus семейства Reoviridae, относящийся к группе А (РВА), служит причиной тяжёлых диарей у человека и различных видов млекопитающих. Вакцинопрофилактика - наиболее эффективный способ снижения уровня заболеваемости РВИ. В настоящее время экспериментально доказана эффективность использования поросят-гнотобиотов в качестве универсальной модели для воспроизведения РВИ человека и оценки качества вакцинных препаратов против РВИ.

Цели и задачи. Оценка иммуногенной активности клонированного штамма Wa РВА в опыте на новорождённых поросятах вьетнамской вислобрюхой породы.

Материал и методы. Получение клонированного штамма Wa РВА человека, rVP6 РВА человека. Иммуноферментный анализ и полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией для выявления РВА человека. Иммунизация и экспериментальное заражение новорожденных поросят.

Результаты. В статье представлены результаты опыта по двукратной иммунизации новорождённых поросят препаратами нативного вируса с инфекционной активностью 5,5 lg ТЦИД50/мл в дозе 3 см3, HRV с адъювантом в дозе 500 мкг и плацебо (контроль) с последующим экспериментальным заражением всех животных вирусом вирулентного штамма WaG1P[8] РВА человека с инфекционной активностью 5,5 lg ТЦИД50/мл в дозе 5 см3. Клинические признаки болезни и гибель наблюдали только у контрольных животных. Разработан метод детекции РНК РВА с помощью ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в ректальных смывах, пробах тонкого отдела кишечника и периферических лимфатических узлах. На основе полученного rVP6 РВА человека разработан метод выявления специфических IgG-антител к РВА с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), и приведены результаты выявления РВА в сыворотке крови подопытных поросят.

Заключение. В ходе проведённых исследований установлена высокая иммуногенная активность нативного и очищенного вируса клонированного штамма Wa РВА и подтверждена возможность его применения в качестве основного компонента вакцины против РВИ. Показана возможность использования конвенционных новорождённых поросят вместо поросят-гнотобиотов в качестве опытной модели.

165-172 428
Аннотация

Введение. Цитокины, активируемые в ответ на иммуносупрессивные вирусные инфекции, могут прямо или косвенно влиять на неопластическую трансформацию В-клеток. В настоящем исследовании изучали новую субстанцию, разработанную для получения противовирусного лекарственного средства ЦелАгрип (CelAgripus, ЦА), которая проявляет интерферон- (ИФН) и цитокин-индуцирующую активность и, по-видимому, может быть использована в качестве активатора противовирусного иммунитета.

Цель исследования - оценить цитокин-регулирующее действие ЦА в линиях клеток лимфомы Беркитта (ЛБ), латентно инфицированных вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ).

Авторам предстояло изучить ЦА-индуцированную экспрессию генов цитокинов - интерлейкинов (ИЛ) -1р, -2, -4, -6, -8, -10, -12, -17, -18; ИФН-а, -Y, -в, -А1, -Л2, -Л3; фактора некроза опухоли а (ФНОа) в нормальных и трансформированных ВЭБ клетках ЛБ.

Материал и методы. Использовали линии клеток фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ), Namalva, Daudi, Raji и Р3НR-1, на которых изучали препараты ЦА, госсипол-уксусной кислоты (ГУК), натрий-карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ) с помощью методов ОТ-ПЦР и оценки цитотоксичности.

Результаты. Выявлено действие ЦА на экспрессию генов ИФН-Л, ИЛ-1р, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-10. Направленность цитокинового ответа зависела от вида клеток и дозы препарата.

Обсуждение. При обработке ЦА клеток ЛБ наблюдались активация генной экспрессии ИФН-Л, ИЛ-1Р, -6, -8 и супрессия активности гена ИЛ-10. При действии субстанций Na-КМЦ и ГУК, используемых для синтеза ЦА, выявлено, в основном, подавление экспрессии генов ИФН-р, ИЛ-1Р, ИЛ-10, ИЛ-18 и ФНОа.

Заключение. Субстанция ЦА оказывает новые эффекты по активации экспрессии ряда ключевых цитокиновых генов в перевиваемых линиях клеток ЛБ. Направленность цитокинового ответа зависит от вида клеток и дозы препарата.

173-177 457
Аннотация

Введение. Лейкоз крупного рогатого скота (КРС) - широко распространённая во всём мире инфекция, возбудитель которой - вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) по структурному строению и функциональным особенностям схож с вирусом Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1 и HTLV-2) и рассматривается как актуальная медико-социальная проблема. Изучение иммунного ответа у экспериментально инфицированных телят на ранней стадии развития болезни, синтеза специфических антител классов G (IgG) и M (IgM), диагностической информативности выявления IgM при лейкозе КРС актуально и определяет цель данного исследования.

Материал и методы. Образцы крови и сыворотки крови КРС: животных, экспериментально инфицированных ВЛКРС, больных лейкозом КРС; контрольные отрицательные; специфические к гетерологичным возбудителям болезней КРС. Непрямой и сэндвич-вариант твердофазного иммуноферментного анализа (ТФ ИФА); коммерческие наборы ТФ ИФА (IDEXX, США; ООО «Хема», ФКП Курская биофабрика фирма «БИОК», Россия) для выявления специфических IgG и IgM к ВЛКРС, в реакции иммунодиффузии в агаровом геле (РИД).

Результаты. Гуморальный иммунный ответ развивается вскоре после инфицирования - к 1-8-й неделе. IgM выяв-ляются начиная с 3-х суток, а IgG - с 7-х суток после заражения. Обнаружено до 97% совпадений положительных результатов в РИД и непрямом варианте ТФ ИФА на основе моноклональных антител к IgM КРС.

Обсуждение. Динамика синтеза антител классов М и G к гликопротеину gp51 ВЛКРС имеет дозозависимый волнообразный характер, согласуется с уровнями повышения/снижения абсолютного и относительного количества лейкоцитов/лимфоцитов крови инфицированных телят.

Выводы. Сывороточные специфические IgM обнаружены начиная с 3-х суток после инфицирования ВЛКРС. Раннее выявление IgM в сыворотке крови КРС может быть использовано как дополнительный тест для выявления больных животных.

178-184 267
Аннотация

Введение. В аспекте экономически значимых инфекций герпесвирус крупного рогатого скота (КРС) 4-го типа (BoHV-4) слабо изучен. Данных о циркуляции вируса среди животных и его роли в инфекционной патологии в России недостаточно.

Цели и задачи исследования: разработка полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени для обнаружения ДНК вируса и изучение частоты его выявления в пробах биоматериала от животных с различной клинической патологией в моноварианте и в ассоциациях с другими вирусами.

Материал и методы. Мишенью для амплификации служили нуклеотидные последовательности гена гликопротеина L. Для анализа и конструирования праймеров использовали последовательности референтных штаммов, опубликованные в GenBank. Исследования проводили в 3 регионах Западной Сибири на 5 крупных молочных комплексах.

Результаты. 27,7% проб биоматериала содержали геном вируса. Вирус присутствовал в моноварианте в смывах из носовой полости телят (80,0%), лёгких (46,2%) и бронхиальных лимфатических узлах (38,5%) при пневмониях. При диареях вирус выявили в 20% проб, а у коров с гинекологической патологией - в 10,0% проб. При респираторных болезнях телят вирус выявляли в ассоциации с вирусами инфекционного ринотрахеита КРС (BHV-1) (21,6%) и коронавирусом КРС (BoCV) (20,3%), а при гинекологической патологии коров - с вирусом вирусной диареи КРС 1-го типа (BVDV1) (6%).

Обсуждение. По результатам филогенетического анализа, из 5 выявленных изолятов вируса, четыре принадлежали к Американской ветви штаммов и один - к Европейской. Американские штаммы циркулировали на территории Республики Казахстан (1), Тюменской (1) и Новосибирской (2) областей, а европейский изолят был выделен от животных в Новосибирской области.

Заключение. При интенсивном развитии молочного животноводства в России актуальны поиск вирусных агентов, участвующих в этиологии инфекционной патологии животных, а также изучение генетического разнообразия вирусов, циркулирующих на конкретной ферме, в том числе завезённых из других стран.

185-192 223
Аннотация

Введение. В 2013-2014 гг. на территории Казахстана от диких птиц были выделены ранее не описанные в науке штаммы парамиксовирусов, впоследствии идентифицированные как представители нового вида - Avian avulavirus 20.

Цель и задачи исследований заключались в молекулярно-генетической характеристике изолятов новых авулавирусов и определении их филогенетических взаимоотношений.

Материал и методы. Биологическими образцами в виде клоакальных и трахеальных смывов от диких птиц заразили развивающиеся куриные эмбрионы с последующим выделением культуры вирусов. Полные нуклеотидные последовательности геномов вирусов получены методом массового параллельного секвенирования нуклеиновых кислот вирусов с биоинформационной обработкой результатов.

Результаты. При первичном заражении куриных эмбрионов пробами от 179 диких птиц, относящихся к семействам утиные, чайковые, бекасовые и ржанковые, выделены 19 гемагглютинирующих агентов, из которых 5 впоследствии оказались представителями новых видов парамиксовирусов. Исследование секвенированных последовательностей их геномов выявило их идентичность по размерам, но значительную генетическую вариабельность внутри вида. Выявлены 2640 нуклеотидных замен, из них 273 оказались несинонимическими, т.е. оказывали влияние на белковую структуру вирусов. Показано, что изоляты Avian avulavirus 20/озёрная чайка/Балхаш/5844/2013 и Avian avulavirus 20/черноголовый хохотун/Атырау/5541/2013 оказались на 86 и 95% соответственно идентичны ранее описанному референсному штамму, что свидетельствует о значительной эволюционной дивергенции внутри вида. обсуждение. Авторы предполагают существование двух независимых линий - Каспийской, представленной референсным Актау/5976 и Атырау/5541, а также географически значительно отдалённой Балхашской линии. Заключение. Проведённые исследования подтверждают, что птицы семейства чайковые являются основным резервуаром Avian avulavirus 20 в орнитофауне, играют ключевую роль в поддержании авулавирусов в биосфере и представляют потенциальный источник возникновения новых вариантов. Непрерывное наблюдение за ними в дикой природе - одна из важнейших задач при обеспечении безопасности птицеводства.

193-200 578
Аннотация

Введение. Африканская чума свиней (АЧС) является особо опасной геморрагической болезнью свиней, которую вызывает крупный ДНК-содержащий вирус семейства Asfaviridae). Поскольку нет эффективных и безопасных вакцин против АЧС, актуально изучение функций белков вируса путём анализа особенностей репликации вируса АЧС в присутствии рекомбинантных белков in vitro.

Цель - изучить функции и степень влияния CD2v, pE248R и pX69R на скорость и уровень репродукции вируса АЧС in vitro для разработки подходов к созданию вакцины против АЧС.

Материал и методы. Использовали вирус АЧС изолят Krasnodar 07/17 и штамм АЧС/ВНИИЗЖ/CV-I. Гены X69R, EP402R и E248R клонировали в векторе pJET1.2/blunt в клетках Е. coli JM-109. Локализацию рекомбинантных белков в клетках CV-1 изучали в реакции прямой иммунофлюоресценции с использованием ФИТЦ-конъюгата поликлональных антител. Уровень репродукции вируса АЧС оценивали в реакции гемадсорбции и в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Результаты. Сконструированы экспрессирующие рекомбинантные плазмиды pCI-neo/E248R, pCI-neo/EP402R и pCl-neo/X69R. Определена локализация и подтверждена специфичность полученных белков CD2v, pE248R и pX69R, для которых установлено, что они повышают уровень накопления вируса АЧС на 3-5-е сутки эксперимента на ~1,2-1,5 1дГАдЕ50/см3 по сравнению с отрицательным контролем.

Обсуждение. В результате анализа установлена важная роль белков CD2v, pX69R и pE248R в репродукции вируса, поскольку они влияют на её уровень. Функция белка pX69R неизвестна, однако в проведённых экспериментах определено его влияние на репродукцию вируса АЧС, проявившееся в увеличении уровня его накопления. Заключение. Данная методология позволяет изучить характер влияния белков с неизвестной функцией на репликацию вируса АЧС.



Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0507-4088 (Print)
ISSN 2411-2097 (Online)